각 조건에 대해 약 10개 > 견적문의

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각 조건에 대해 약 10개의 오가노이드 또는 1~2개의 채널을 채취했습니다. 기질을 최소화하기 위해 메스를 사용하여 채널의 위쪽, 아래쪽 및 양쪽 측면에서 과도한 기질을 제거했습니다. 샘플을 에피튜브로 옮기고 DBPS +/+ 로 세척했습니다 . 제조사의 지침에 따라 RNeasy Plus Mini Kit를 사용하여 RNA를 분리했습니다. RNA 농도는 Qubit 및 Nanodrop 1000 분광광도계를 사용하여 측정했습니다. NanoString 분석을 위해 맞춤형 신장 유전자 패널 프로브를 사용했으며, 172개의 주요 유전자 전체 패널 또는 처음 48개의 주요 유전자로 구성된 축약 패널을 사용했습니다( 표 S5 ). RNA는 제조사의 지침에 따라 적절한 시약을 사용하여 NanoString nCounter Elements로 정량했으며, 회당 50~100ng의 RNA를 사용했습니다. RNA는 프로브 풀, 하이브리드화 버퍼 및 TagSet 시약과 함께 총 30μL의 부피로 혼합하여 67°C에서 20시간 동안 배양했습니다. 정량 데이터는 맞춤형 고급 분석을 사용하여 nSolver 소프트웨어로 분석했습니다. 초기 분석에서는 낮은 발현량 데이터를 제외하지 않았습니다. ACTB , GAPDH 및 TUBB는 하우스키핑 유전자로 지정했습니다. nSolver에서 데이터를 처리한 후, 낮은 발현량 데이터는 추가 분석에서 제외했습니다. 낮은 발현량 유전자는 모든 실험 조건에서 적어도 한 번의 반복 실험에서 mRNA 발현량이 임계값 미만인 유전자로 정의했습니다. p 값이 0.05 미만일 때 유의미한 차등 발현이 있는 것으로 간주했습니다. 본 연구는 2배 발현량 변화를 감지할 수 있도록 검정력 0.8을 확보했으며, 생물학적 반복 실험 횟수는 예비 데이터를 기반으로 결정했습니다. 데이터는 R을 사용하여 그래프로 나타냈습니다.

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